依据空气流的动力学原理,以冷热气流为介质升降温度。优点:变温迅速,扩增效果好,适合于微量、快速PCR;反应器不受形状限制,管外无需涂液体石蜡;测定管内液体温度作为控温依据,显示温度真实可靠;易于用微电脑设定复杂的变温程序;易于制成重量较轻的便携式仪器,适合外出作业。缺点:以室温为温度下限,低温难控制,对空气流的动力学要求较高,需精心设计才能使各管温度均匀。
所谓real-time Q-PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光***,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在 real-time 技术的发展过程中,两个重要的发现起着关键的作用:(1)在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现,它能降解特异性荧光记探针,因此使得间接的检测PCR产物成为可能。(2)此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和***的商品化发展导致real-time Q-PCR方法在研究工作中的运用。
PCR***扩增法在遗传性***产前诊断中的应用,遗传病是由于遗传物变化而引起的机体某一功能或缺陷或异常所致的***,其根本变化在于遗传物质。其类型包括单***遗传病,染色体遗传病及多***遗传病。遗传病诊断除询问病史,一般物理诊断,普通实验室检查及了解症状、体征外有特殊性。过去常应用系谱分析,染色体及性染***质检验作为遗传病诊断的主要依据,再辅以相关的酶学分析从而作出诊断。随着分子生物不的迅速发展及其在遗传诊断中的广泛应用,***诊断技术诞生,***诊断技术为遗传病的临床诊断起了很大的促进作用。聚合酶链反应(PCR)技术是***诊断主要技术之一。这种快速、灵敏的***体外扩增技术与多种分子生物学手段相配合可以检出大部分已知的***突变、***缺失、染色体错位等,PCR技术日益成为遗传病诊断的、的方法之一。以下举几个在国内有普遍意义的例子。
若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标,则PCR反应变为双重PCR,双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争,尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时,这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的,所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因,传统定量方法虽然加入内标,但仍然只是一种半定量的方法。