三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系。在PCR反应中,dNTP应为50-200μmol/L,尤其是注意4种dNTP的浓度要相等(等摩尔配制),浓度过低又会降低PCR产物的产量。5. 镁离子浓度Mg2+能与dNTP结合,Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响。在一般的PCR反应中,各种dNTP浓度为20μmol/L时,Mg2+浓度为1.5~2.0mmol/L为宜,Mg2+浓度过高,反应特异性降低,出现非特异扩增:浓度过低,会降低taqDNA聚合酶的活性,使反应产物减少。
其次通过长短结合、内外结合进行产品结构调整。在产品结构调整中一方面要通过做减法来***“长线”产品,金属管浮子流量计,涡轮流量计,涡街流量计,而更重要的是在调整结构做加法时不能盲目地追逐市场产品的生产,一旦各地区、各部门同时不计后果上产品的生产线,其结果是造成该产品的生产能力过剩和新一轮的产品结构不合理。各地区、各部门在产品结构调整中要坚决避免出现结构趋同的现象,不能让市场经济这只“看不见的手”牵着鼻子走,而应当从本地区、本部门的关际出发进行合理地“预期”,保证产品结构合理化,保证我国仪器仪表行业的健康发展。
PCR技术的本质是体外核酸扩增,加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交,在Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25~40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
普通的PCR仪
一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,又叫传统的PCR仪。
用途:主要是做一些简单的、对单一退火温度的目的***进行扩增。
(1)梯度PCR仪: 一次PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常为12种温度梯度的普通PCR仪。
用途:研究未知DNA退火温度的扩增。
(2)原位PCR:将具有细胞***能力的原位杂交技术运用于从细胞内靶DNA的***分析,在细胞内实现***扩增的普通PCR仪。
用途:用于在细胞的靶DNA所在位置上进行***扩增。