●打开水浴锅加热至37℃。
● 超净台上放好离心管(离心管规格选用15ml的),细胞培养瓶,移液管,紫外灭菌至少20至30分钟,吹风5至10分钟除去臭氧。
● 37℃预热好要复苏细胞的培养液,也可以不用预热培养液,根据细胞情况选择。
●向离心管中加约5至10ml培养液,从液氮罐或-80℃中取出冻存细胞,立即将冻存管放入37℃水浴中并轻轻摇动,待融化后(约2min即可)立即将解冻的细胞转移至含培养液的离心管中,800-1000rpm下离心5min,弃上清,加适量完全培养液轻轻吹打重悬细胞后转移至细胞培养瓶中,轻晃使瓶底液体分散均匀,标好细胞名称、代数、复苏日期,显微镜下观察后放入37℃,5%CO2培养箱中。一般贴壁细胞过夜即可贴壁,换液和传代时间根据不同细胞生长情况而定。
对于实验室离心机的离心管分类,可根据其材质属性进行区分,这样便可以将离心管区分成玻璃材质离心管与塑料材质离心管两个大类。
而其中作为塑料材质的离心管,又可以细分为PP、PS等,根据不同需要,厂家会选择不同的塑料材料来进行制作。
实验室离心机常用离心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用的较多,因为玻璃的离心管不能用在高速或者离心机上。
重量平衡在离心中非常重要。离心机的转头在高速运动中有很高的动态能量。如果没有正确平衡好,整个离心单位会脱离它所在的位置,造成严重的损害。
一旦您确定转头和盖子都固定好了,就可开始离心,在速度达到您设定的转速前不要离开。如果您发现问题,找一个有经验的实验人员来帮助您。
离心结束后,您应当会看见您的生物学样品位于离心管底部的沉淀中。它已经从称为上清的余液中分离出来了。
可以通过倾倒,也就是直接倒出来去除上清,也可将上清吸出,就是用真空吸力将其吸出。
纯化的样品可以被重新放回溶液中,这个过程称之为重悬。重复离心细胞,然后吸出上清留下细胞,再用缓冲液重悬细胞,这个过程称之为细胞洗涤。
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