在普通PCR仪的基础上增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统的PCR仪称作荧光定量PCR仪。其PCR扩增原理和普通PCR仪扩增原理相同,只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记,使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统得出量化的实时结果输出。把这种PCR仪叫做实时荧光定量PCR仪(qPCR仪)。荧光定量PCR仪有单通道、双通道和多通道。当只用一种荧光探针标记的时候,选用单通道,有多荧光标记的时候用多通道。单通道也可以检测多荧光的标记的目的***表达产物,因为一次只能检测一种目的***的扩增量,需多次扩增才能检测完不同目的***片段的量。主要用于***临床检测、生物研发、食品行业、科研院校等机构。
在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较,在real-time Q-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 (baseline),荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。
1、良好的实验室管理中包含了对仪器的定期质控。
2、定期对PCR仪进行温度测定可以完善实验室的质量管理体系。
3、PCR仪的温度条件和状态对于PCR***盒的研发和应用来说,是的条件之一。
4、根据测温的结果可以避免某些***盒对某些特定品牌型号仪器的依赖,拓宽***盒的应用范围。
5、在合格的仪器上做实验可以极大的节约人力物力。
6、对于拥有老旧仪器和高强度使用的实验室来说,节省效果尤为明显。
热盖功能
热盖功能已成为PCR仪的必备功能。热盖温度设为105℃,使样本管顶部的温度达到105℃左右,蒸发的反应液就不会产生凝集在管盖上而改变反应体,大大提高实验效率和准确性。
热盖分为可调式热盖和不可调式热盖。可调式热盖中的力矩式可调热盖,能够解决压紧热盖时用力过大及过小的问题。如果是旋转加压的热盖就要特别小心,因为压力到达时没有明显的提示,用户需要根据经验将热盖旋到合适位置,不太容易掌握。