PCR技术的本质是体外核酸扩增,加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交,在Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25~40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
普通的PCR仪
一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,又叫传统的PCR仪。
用途:主要是做一些简单的、对单一退火温度的目的***进行扩增。
(1)梯度PCR仪: 一次PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(温度梯度),通常为12种温度梯度的普通PCR仪。
用途:研究未知DNA退火温度的扩增。
(2)原位PCR:将具有细胞***能力的原位杂交技术运用于从细胞内靶DNA的***分析,在细胞内实现***扩增的普通PCR仪。
用途:用于在细胞的靶DNA所在位置上进行***扩增。
PCR的早设想 核酸研究已有100多年的历史,本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究***的体外分离技术,Korana于1971年早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可tRNA***”。
PCR的实现
1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内,只是在试管中给DNA的体外合成提供以致一种合适的条件---摸板DNA ,寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合适的缓冲体系,DNA变性、复性及延伸的温度与时间。
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