步骤:(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、,逐滴加入二亚砜 (DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞,用加的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(DMSO***后浓度为5~10%),使细胞浓度为1~5×106cells/ ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
液体冷却状态, 在液态阶段(到达结晶点前),冷却速度必须能有规律地避免影响细胞膜的热冲击。这里拓纷程控速率冷冻仪证明了其度和灵活性:超绝缘的冷冻腔,可控的氮流入量和精细的温度控制 - ***低到-0.1℃每分钟。液体到结晶状态,冰晶形成阶段,以温度的突然上升为特征,是冷冻过程中***关键的步骤。控制软件将会通过严格控制的降温来调节冷冻曲线,并以此来及时预见成核现象。拓纷程控速率冷冻仪设备因此会给细胞核膜提供比较大的保护。
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