低温休眠技术代表着我们对未来无线的遐想,包括延长寿命、星际旅行,等。早在1972年就成立了Alcor会,该会在1976年进行了首例人体冷冻术,该机构为早成立的人体冷冻组织机构。目前,已为100多人进行冷冻术。美国《财富》杂志称,Alcor的客户包括很多亿万富翁,他们向会捐赠大量资金,资助其研究人体冷冻技术。但就现实层面而言,目前低温生物学的发展还难以达到想科幻电影中的那样完整个体的保存,更多的还是单体的细胞层面,比如胚胎、、哺乳动物细胞、、、组织切片和啮齿动物等。
步骤:(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、,逐滴加入二亚砜 (DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞,用加的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(DMSOzui后浓度为5~10%),使细胞浓度为1~5×106cells/ ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
冷却到稳定的冰晶状态(-110℃)在冰晶生成的关键阶段,在环境和细胞之间继续发生热交换。zui短的温度降低峰值的可能性,加之速度快,统一的冷冻,zui小化了对细胞膜的损坏,确保比传统冷冻方法增加10%的有效。在特殊叶片集合上液氮注射,拓纷程控速率冷冻仪涡轮机确保瞬间蒸发,并且统一执行,混合,保证了相当低的温度,这是整个阶段中的重要因素。
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