程序降温仪是把生物样品在 降温冷冻过程中,当由液态向固态变化的相变期内会释放一定热量,使其温度回升, 不控制降温速率的冷冻过程将会导致***细胞。准确地测定生物样品的相变点, 用微机编制降温程序,以便在样品相变时加大液氮输入量,克服相变样品温度的回 升,使细胞安全而迅速地度过相变期,这是提高被冻样品成活率的关键环节。
细胞冷冻保存,1. 材料:生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法:(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->-20 ℃30分钟--->-80 ℃ 16~18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量,亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温:利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1~-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
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