再此背景下,细胞存储***、细胞库等很多生物公司和相关研究机构变得火热起来,但冻存细胞是个“技术活”,选择合适的降温仪器,才能保证珍贵的有高质量的复苏活性。免液氮的程序降温仪出现了。这款仪器针对于传统的液氮程序降温仪做了很大的技术革新,采用***的斯特林循环引擎(Stirling Cycle Engine),可提供的、重现性的生物制冷效果。
以上问题,可通过倍玛特程序降温仪对降温速率的“精细控制”轻松解决——降温的不同阶段,采用不同的降温速率,可有效减少细胞损伤,提高复苏率。一般为“先慢冻,后快冻”。目前市面上常用的倍玛特品牌程序降温仪工作原理是:通过微处理器控制系统和电磁阀,控制喷入腔体中的液氮量来控制降温速率。其优点是:控温,受外界环境影响小。尤其是处理大体积样本时,快速喷入的大量液氮更易带走样本中的潜热,从而快速降温,保证更好的样本复苏活性。
快速降温保存,即玻璃化方法就是用高浓度的冷冻稀释液,以极快的速率降温,使溶液内没有足够的时间形成冰晶核就直接转变成无形态的玻璃样固体的过程。此方法的优点是不用的程序控制降温仪,操作简便、快速,减轻损伤,但是由于在降温过程中需要加入大量的冷冻保护剂,高达40-60%v/v,这些冷冻保护剂往往存在一定毒性会内部细胞,同时由于玻璃化过程中为了确保整个生物样品的内部和外部均能实现快速降温,需要减少样品的尺寸、以及增加和外界超低温环境(比如液氮)的接触面积。因此这种暂时只适用于小尺寸、小计量生物样品的保存,仅有ul单位。所以,目前大家还是通常采取慢速降温进行低温保存。
在细胞冻存的过程中,液态水转化为冰,细胞代谢停止。同时,水分也随之散失,导致细胞内盐、代谢物浓度改变,进而造成渗透压失衡,直接影响冻存细胞的复苏。同时,冷冻速率太快或太慢,容易导致细胞内水分丧失或形成大冰晶,都不利于细胞存活。通过使用程控降温仪,选择合适的冻存液,设定合适的升降温速率,可有效地克服上述不利因素。实践证明,(经温度补尝后)每分钟1-3℃的冷冻速率可大大提高冻存细胞的存活率。