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本产品是含有次黄piào呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸苷(T)和甘氨酸的混合物,适用于杂交瘤筛选和细胞培养应用。
HAT选择性培养基,HAT是黄piào呤(Hypoxantin)、氨基蝶呤(Aminopterin)和胸腺嘧0啶脱氧核苷(Thymidin)三种物质英文首字母缩写,用于筛选具有次黄piào呤磷酸核糖转移酶(HPRT)或胸苷激酶(TK)活性缺陷细胞的培养基,是含有次黄piào呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸苷(T)和甘氨酸的完全培养基。在氨基蝶呤(二氢叶酸类似物)存在下,这种酶缺陷的细胞不能通过核苷酸合成旁路合成次黄piào呤和胸苷。HPRT和TK缺陷细胞可以在此培养基中生存。是常用的骨0髓杂交瘤细胞选择性培养基
杂交瘤单克0隆抗0体制备常见问题解答 1. 小鼠腹腔制备的单克0隆抗0体为什么不能直接用于***治0疗?要如何才能?小鼠的单克0隆抗0体是属于鼠源性...《艺ji回忆录》章子怡:你这么努力,活该被别人羡慕!
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常用的饲养细胞有:小鼠腹腔巨噬细胞(较为常用)、小鼠脾0脏细胞或胸腺细胞。1.HAT选择杂交瘤细胞 脾细胞和骨0髓瘤细胞经PEG处理后,形成多种细胞的混合体,只有脾细胞与骨0髓细胞形成的杂交瘤细...动物细胞融合与单克0隆抗0体的模拟试0题
棋盘滴定确定***的***佳浓度
1.加 100μl 稀释液到 2~12 列的每孔。
2.加 200μl 稀释的***到第yi列的每孔中。
3.从第01 列的孔中取 100μl 转移到第二孔中,混匀用***吹吸 3~5 次。
4. 重复步骤 3 向后稀释,一直到第011 列,吸取第011 列 100μl 弃去, 第012 列作为
对照。 重复以上的操作,从 A 排至 G 排, 稀释第二个***,H 排作为对照。
7.操作步骤
7.1 杂交瘤筛选
包被液:在 1×包被液中稀释抗原至合适的浓度(一般 1~10μg/ml)。
一抗工作液:含有单克0隆抗0体的培养液。
二抗工作液:取 25μl 的酶标二抗稀释到 5.0 ml 1X BSA 的稀释/封闭液中或更大稀释比例。
7.1.1 包被抗原
1. 加抗原到酶标板中。
2. 室温孵育 1 小时。
3. 甩掉板中液体并拍净残液,每孔加入洗涤液 200ul,洗涤 3 次并拍净残液。
7.1.2 封闭酶标板
1.加 200 uL 1X BSA 稀释/封闭液到每孔中。
2. 孵育 30-45 分钟, 甩掉板中液体并拍净残液,每孔加入洗涤液 200ul,洗涤 3 次并拍净
残液。
7.1.3 与含单克0隆抗0体的培养液反应
1.每孔中加 100 uL 含单克0隆抗0体的培养液。
2. 室温反应 1 小时.
3. 甩掉板中液体并拍净残液。
7.1.4 洗板
1. 加入 1X 洗涤液。
2. 甩掉板中液体并拍净残液。
3. 重复 3~5 次。
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