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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
1.选择部分样品进行预实验,参考目的蛋白一抗说明书进行3个稀释度的预实验
2.向客户反馈预实验结果,等待客户确认预实验结果后确定是否进行正式实验
3.请您提供质量0保证的一抗(或委托我公司代购)。抗0体的使用量通过预实验后进行确认,一般不回收使用一抗
4.如果需要对膜上目的蛋白进行抗0体剥离(洗脱或者 stripping)的,请提前说明
注意事项:
1、Actin抗0体在Western实验后,注意回收稀释的抗0体。回收的抗0体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗0体,包括已经使用过的稀释抗0体,4℃保存。
2、 回收后重复使用的抗0体,使用方法同新鲜稀释的抗0体。如果在重复使用过程中发现抗0体出现轻微混浊现象,可以10000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗0体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗0体。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
单克0隆抗0体(单抗制备)制备过程有以下几个步骤:
步骤一:细胞免0疫
免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免0疫方案进行免0疫***。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官,刺激相应B淋巴细胞克0隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。
步骤二:细胞融合
采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾0脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
人们抽取动物的血液,分离出含抗0体的。这种体内生产抗0体的传统方法有许多缺点。例如所获得的抗0体不纯,不能连续生产,动物饲养与管理工作繁重等,故长期以来***家们一直在探索在试管内(即体外)生产抗0体的方法, 1976年英国剑桥大学两位科学家Milstein和Koh1er将小鼠瘤细胞与小鼠的脾细胞杂交。小鼠瘤细胞能在体外增殖传代并能分泌无抗0体活性的球蛋白;小鼠脾细胞能产生针对某种抗原的抗0体,但不能在体外增殖。将两者融合成一种杂交瘤细胞,后者继承了两个亲代细胞的特点,既可在体外增殖,又可产生针对某种抗原的抗休。一个杂交瘤细胞在体外不断增殖所形成的细胞集团,被称之为。
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