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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
抗0体亚型鉴定原理:
抗0体亚型鉴定的原理是利用双抗0体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克0隆抗0体或特异亲和纯化的单克0隆抗0体的类和亚类(可区分出 IgG1﹨IgG2a﹨IgG2b﹨IgG3﹨IgM﹨IgA)。采用小鼠抗0体共有位点的二抗包被微孔板,与加入的培养上清中的小鼠抗0体结合,再加入HRP 标记的抗小鼠各类、亚类的抗0体来分别反应,***后用 TMB 底物系统显色并用稀***终止,再通过酶0标仪检测吸光度来判断被测单克0隆抗0体的类或亚类。
实验步骤:
1 、首先将ELISA***盒***室温(大约30分),然后用纯水把清洗液配成工作浓度(1份浓缩清洗液加19份纯水)。
2 、取出酶标板。每个标本需要6孔,阳性对照6孔,阴性对照6孔。多余的用自封袋保存,记得放入干燥剂。
3 、将标本检测孔每孔先加入标本稀释液各50μl。然后将50μl 细胞培养上清(或特异亲和纯化的抗0体)再加入酶标微孔板,每个标本加6孔;阳性对照和阴性对照孔不加标本稀释液也是各加6孔每孔100μl。贴上封板膜37℃温育30分钟。
1、水佐剂不***抗原天然构象,从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克0隆抗0体,这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。
2、水佐剂是一种水溶性佐剂,使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程,抗原和佐剂只需简单混合即可用于免0疫动物。
3、水佐剂使用肌肉免0疫途径,与常规小鼠单克0隆抗0体制备过程中使用足垫免0疫或脾内免0疫相比,极大地方便了使用。
4、水佐剂的***重要用途是可方便地用于制备小鼠多克0隆抗0体。常规多克0隆抗0体制备多使用兔子,不但免0疫针次多、抗原用量大和抗0体产生慢,而且由于技术要求较高而往往需要委托外单位制备。使用快速水溶免0疫佐剂,任何动物实验人员均可方便快速地制备小鼠多克0隆抗0体,只需要简单地免0疫5只小鼠,即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克0隆抗0体。
5、水佐剂建议室温运输,2~8oC保存,无菌取用,有效期6个月。
博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
单克0隆抗0体的大量制备
单克0隆抗0体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
1、体内诱生法 取Balb/c小鼠。
首先腹腔***0.5ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克0隆抗0体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注0射器抽取腹0水,即可获得大量单克0隆抗0体。
2、体外培养法
将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克0隆抗0体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克0隆抗0体。但这种方法产生的抗0体量有限。近年来,各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗0体的生产量。
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