本***盒采用改良的碘氧化法活化辣根过氧化物酶（HRP），经过氧化以后活化的HRP 可以与待标记物的游离氨基结合，发生希夫碱反应（Schiff's Base Reaction）。本品本***盒适用于带有游离氨基的物质的标记，比如：带有游离氨基（伯胺）的小分子化合物，蛋白或抗0体。

货号                   HRP酶量   可标记抗0体量    可标记蛋白量     ***佳反应体积

BF06095-1000     1mg        1mg                  1-4mg                1ml

BF06095-5000     5mg        5mg                  5-20mg               5ml

储存：-20℃或-70℃

经过3级100nm过滤，符合国际胎牛血0清检测标准。适用于各种细胞，特别是杂交瘤细胞培养。

产品特点:

1.   内毒0素含量≤5EU/ml

2.   血红蛋白含量≤0.02%（W/V）

3.   促细胞生长曲线峰值＞1.8×10e6 /ml

4.   细胞倍增时间＜15小时

5.   细胞克0隆＞80%

6.   BVD（牛腹泻病毒）、P13（副流0感病毒）、IBR（牛传0染性鼻气管炎病毒）检测结果均为阴性（未检出）。

注意：使用前请灭活（56℃，20-30min）

7.1.5 加二抗

1. 每孔加 100 uL 二抗。

2. 室温反应 1 小时。

3. 甩掉板中液体并拍净残液，洗板 3 次。

7.1.6 显色反应

1. 每孔加 100 uL 底物，室温反应 1~ 15 分钟。

2. 每孔加 50ul 终止液。

3. 测 OD 值，检测波长 450nm。

7.2 直接 ELISA

抗原包被液：将抗原稀释在 1X 包被液中，浓度 1～10μg/ml。

酶标抗0体：稀释到 1X BSA 封闭液中，稀释度参考条件优化方法。

7.2.1 加抗原

1. 在酶标板中每孔加入 100μl 抗原包被液。

2. 室温孵育 1 小时。

3. 甩掉板中液体并拍净残液，每孔加入洗涤液 200ul，洗涤 3 次并拍净残液。

7.2.2 封闭

1. 每孔加 200μ1X BSA 封闭液。

2. 37℃ 反应 45 分钟，甩掉板中液体并拍净残液，每孔加入洗涤液 200ul，洗涤 3 次并拍

净残液。

8.可能出现的问题和解决办法

8.1 以下结果表示实验有效：

阴性对照：无色

背景对照：OD 值低于 0.2

阈值对照：中度显色

强阳性对照：深度显色，OD≥1.0

8.2 希望增加特异性信号

1. 增加酶标抗0体的浓度或延长孵育时间或提高孵育温度。

2. 延长底物的孵育时间。

3. 增加包被抗原浓度或延长孵育时间。

4. 用纯化的抗原。

5. 封闭时间缩短或增加 BSA 稀释/封闭液的稀释度。

6. 减少洗板次数或操作更轻柔。

8.3 减少非特异性信号

1. 减少包被抗原浓度或缩短孵育时间。

2. 减少酶标抗0体的浓度或缩短孵育时间或降低孵育温度。

3. 缩短底物的孵育时间。

4. 增加洗板次数或延长洗涤液浸泡时间。

5. 通过加低浓度包被抗原或捕获抗0体到稀释的酶标物中以减少结合物的交叉反应。

8.4. 背景忽高忽低，检查洗0板机功能是否正常。

9. REFERENCES

1. Clark, B.R. and Engval, E. (1980). Enzyme Immunoassay, CRC Press, Inc., Boca Raton,FL. 2. Voller, A., Bidwell, D.E., and Bartlett, A. (1979). The Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

(ELISA), A Guide With Abstracts of Microplate Applicati0ns. Dynatech Laboratories Inc. Alexandria, VA. 3. Fleming, J.O. and Pen, L.B. (1988). J. Immunol. Methods, 1110: 11 – 18