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1、预实验及正式实验服务:帮助客户设计样品上样顺序以符合论0文发表要求
2、免费进行蛋白内参检测(所有内参抗0体均免费提供)
样品要求
1、细胞>1×107;***>30mg;***湿重>1mg;植物>100mg;血0清>50ul;等
2、样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量>200ug/样品
客户提供材料
1、新鲜或正确保存的样品(按照我们的要求提供)
2、目的蛋白一抗:我们可以给客户免费提供抗0体查找服0务
3、阳性对照样品(尽量提供)
4、相关文献(可选)
提交给客户结果
1、预实验***结果(胶片及扫描图),预实验采取3个一抗稀释度
2、正式实验***结果(胶片及扫描图)
3、完整实验报告
4、IOD值分析报告(可选)
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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
血0清的分离
如果用三角瓶或平皿盛血,将器皿倾斜放置于37oC烘箱2hr,转移到4oC沉淀过夜,第二天早上用吸管吸取血0清。如果用离心管收集,37oC烘箱放置2hr,转移到4oC沉淀过夜,第二天早上离心,10000RCF,10分钟。在血0清中加入NaN3 至终浓度0.02%,分装后-20oC保存。
小结:抗血0清获得之前要件的抗0体的效价、抗0体的特异性以及抗0体的亲和力;获得抗血0清之后,要分装保存抗血0清,一般情况下,-20度可保存数月至数年抗0体的效价都不会发生变化。抗0体的效价可以通过琼脂扩散试验和酶联免0疫吸附试验进行鉴定。
单克0隆抗0体(单抗制备)制备过程有以下几个步骤:
步骤一:细胞免0疫
免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免0疫方案进行免0疫***。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官,刺激相应B淋巴细胞克0隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。
步骤二:细胞融合
采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾0脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
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