沉淀型TMB单组份(HRP底物)
即用型,用于标记物为HRP的WB实验。TMB在辣根过氧化物酶的催化下与氧化剂反应生成水溶性的蓝色产物,此产物可被沉淀出来用于免0疫印记(WB)实验。本品具有非常高的灵敏度,特别适用于需要较高信噪比的实验。TMB是一种非致***性底物,不易褪色,优于DAB、AEC和4-CN。
Catalog_no BF06009
Product_name 沉淀型TMB单组份(HRP底物)
Category WB、IHC、ELISA相关***
产品介绍
生物素/亲合素-HRP 系统提供在冰冻切片、石蜡包埋***和细胞涂片中细胞表面抗原和胞内抗原快速和精0确***的方法。***盒包括正常山羊或兔血0清、生物素标记的二抗和亲合素标记的 HRP。此系统与兔、小鼠来源的一抗使用。非特异性染色用与二抗同种动物的血0清封闭。***、细胞片与未标记的一抗反应后,加生物素标记的二抗,孵育后,洗去二抗,与亲合素辣根酶孵育,洗去后加底物。
***盒组成
1. 洗涤缓冲液(10×浓缩):100ml×2
2. 血0清封闭液:含 10%灭活正常山羊,含防腐剂:50 ml
3. 生物素标记的二抗:含 2.0 μg/ml,0.01M PBS,pH7.4,稳定剂和防腐剂,工作液。规
格:山羊抗兔 50ml;或山羊抗小鼠 50ml
4. 亲合素-HRP,含 2.0 μg/mL,0.01M PBS, pH7.4,稳定剂和防腐剂,工作液,规格:亲
合素-HRP 50ml
加生物素化抗0体
1. 去掉缓冲液,擦掉切片周围的液体。
2. 加生物素化抗0体,完全覆盖切片。
3. 室温孵育 30min。
4. 用洗涤液洗去抗0体,用洗涤液润洗 5min。
加亲合素-HRP
2. 加亲合素-HRP,完全覆盖切片。
4. 用洗涤缓冲液洗去亲合素-HRP,用洗涤缓冲液润洗 5min。
显色
1. 加显色液(自备)显色。
可能出现的问题和解决方法
过度染色
1. 没有有效封闭内源性过氧化物酶。
2. 不完全脱蜡。
3. 过度***粘附。
4. 一抗稀释度不当。
5. 蛋白质非特异性结合。
不染色
1. 忘记加一抗、生物素化二抗或亲合素-HRP。
2. 处理过程中抗原***。
3. 固定不当。
4. 用含叠氮钠洗涤液。
5. 操作过程中样品彻0底干燥。
6. 未按操作程序操作。
染色较弱
1. 加免0疫***前没有将洗涤液去掉。
2. 抗0体稀释不当。
3. 显色前底物放置时间过长。
4. 过氧0化氢的***作用。
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