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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
水佐剂是一种用于制备小鼠单克0隆抗0体和多克0隆抗0体的免0疫佐剂,与常规使用的弗氏佐剂相比,具有免0疫针次少、抗原用量低、抗0体产生快、抗0体滴度高、抗0体亲合力高、不***抗原天然构象和使用方便等优点。
水佐剂使用重要提示
1、水佐剂只需两针免0疫,无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备,与弗氏佐剂相比可至少减少两针次免0疫。
2、水佐剂通过减少免0疫针次和降低每针次抗原用量,从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为
(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);
(2)免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。
3、水佐剂抗0体产生快,抗0体滴度高,抗0体亲合力高,无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备,只需要在三周内进行两针免0疫,通常在第五周即可获得ELISA滴度高1:10000~1:10000000的高亲合力抗0体水平。
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注:
抗原***以前需要收集一些正常血0清,已备检测抗0体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定,大概需要四天左右时间,可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。
免0疫用的抗原必须纯化,否则影响抗0体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能***。将抗原液与佐剂等比例混合后,置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化,乳化过程比较费时、费力,但若乳化不充分,会影响免0疫的效果,振荡后,1000rpm离心一分钟,如水相和油相不分层即可***。首0次免0疫用FCA,以后都用FIA。
免0疫方法可采用背部多点***法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下0***,每点注0.1ml,间隔2周后再于上述部位选不同点***(不要选择临近位点,否则***愈合不好)。每次免0疫的抗原量约100μg。免0疫次数在四五次即可,抗原用量大可以减少次数。
不同细胞表面具有不同Ig的Fc受体,分别用FcγR、FcεR、FcαR等来表示。当Ig与相应抗原结合后,由于构型的改变,其Fc段可与具有相应受体的细胞结合。抗0体与Fc受体结合可发挥不同的生物学作用:
1.介导I型反应变应原刺激机体产生的IgE可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲力受体细胞脱颗粒,释放组胺,合成由细胞FcεRI结合。
2.调理吞噬作用 调理作用(opsonization)是指抗0体、补体C3b、***B等调理素(opsonin)促进吞噬***等颗粒性抗原。
3.发挥抗0体依赖的细胞介导的细胞毒作用。
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