HRP-兔抗人Ig咨询*** 博特龙技术有限公司
作者:博特龙2022/1/18 6:11:34






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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

1、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好,随盒存放。

2、拿放板子时不要剧烈抖动,以免孔间交叉污染出现错误结果。

3、本***一般不会出现两个阳性,但出现两个阳性的现象不论在进口或国产***中都是真实存在的,一般会一个 OD 很高,另一个很低但却还能判为阳性,实验分析表明这种情况下以 OD 高值孔为准,出现这种情况有多重原因:
(1)培养的细胞中有饲养细胞残留,
(2)抗0体本身存在变异,
(3)样品为非特异亲和纯化的抗0体或样品是腹0水,
(4)上清出现少量污染,
(5)实验操作粗放,
(6)加错***。

4、通用阳性对照数据并不一定完全一样,仅作为***有效指示。


水佐剂免0疫步骤

步骤一:用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);(2)免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。

步骤二:充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。

步骤三:通过后腿小腿肌肉***免0疫小鼠,每只小鼠100μl。备注:本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象,抽入针管前应充分混匀,抽入针管后应尽快***。

步骤四:第21天按同样方式加强免0疫一针。备注:每次佐剂和抗原现配现用。

步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定,抗0体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内, 随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注:若极偶尔情况下抗0体滴度达不到实验需求,可在第42天再按同样方式加强免0疫一针。

单克0隆抗0体(单抗制备)制备过程有以下几个步骤:

步骤一:细胞免0疫

免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免0疫方案进行免0疫***。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官,刺激相应B淋巴细胞克0隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。

步骤二:细胞融合

采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾0脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。


单克0隆抗0体的大量制备

单克0隆抗0体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。

1、体内诱生法 取Balb/c小鼠。

首先腹腔***0.5ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克0隆抗0体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注0射器抽取腹0水,即可获得大量单克0隆抗0体。

2、体外培养法

将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克0隆抗0体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克0隆抗0体。但这种方法产生的抗0体量有限。近年来,各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗0体的生产量。



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