HRP-小鼠抗大鼠IgG2c *在线咨询 博特龙技术有限公司
作者:博特龙2022/1/17 16:49:48






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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。



β-actin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照。也常被用于免0疫染色观察细胞的微丝结构。在用作Western的参照时,Actin抗0体和Tubulin抗0体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同,这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。

保存条件:

      Actin抗0体-20℃保存,Western一抗稀释液-20℃或4℃保存,一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存,长期不使用可以考虑-20℃保存,但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。


实验步骤:

1、弃去板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl,通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。

2 、吸弃板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂 A 和显色剂 B 各50μl,换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。

3 、ELISA***盒特异性好一般肉眼即可观察出结果,看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类。更可将反应终止液(每孔50μl)终止反应后用酶0标仪450nm 测长,630nm 参考波长双波长测定结果,参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类(阳性对照 OD 一般不小于0.8,阴性对照一般不高于0.15,阳性判定标准:样品 OD 大于阴性 OD+0.15,阴性 OD 低于0.05按0.05算)。

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取血:

免0疫一周后,可以耳动脉取血检测抗0体效价。因为起初几次免0疫产生的抗0体的效价比较低,头两次取血,够检测用即可。在三次免0疫后,可以获得较高0效价的抗0体,每次取血量可以在40ml,不要取太多,否则会造成兔子贫0血。

前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血,室温过夜析出血0清。

***后一次取血可以采用颈动脉放血,具体操作如下:

1、家兔仰卧于兔架上固定头部,用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。

2、沿颈部中线用***刀切开皮肤约10cm,分离皮下结缔***,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作,如碰到小血管出血,可用止血钳止血)。

3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松***,暴露出颈总动脉后用弯头眼0科镊使之游离,剥离***和结缔***。

4、于动脉下套入两根黑丝线,分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。

5、用小拇指垫在血管下,用尖头眼0科***剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断),插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上,以防放血管滑脱。

6、松开止血钳,使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。


***球蛋白不是的

  首先,丙种球蛋白注入***后产生的力是被动给予的,不是自身主动产生的,一般2周就被排泄,之后体内丙种球蛋白的含量又***到原来水平,要长期保持体内所含丙种球蛋白的高水平,就必须每隔2周***1次。

  其次,应用丙种球蛋白有一定的适应症,因为该药随所含抗0体量的不同而预防效果各异。普通的丙种球蛋白主要用于预防、甲肝、流行性等,想用丙种球蛋白来预防各种***是不可能的。

  第三,如果反复***丙种球蛋白,因其本身可作为抗原,刺激***产生一种对抗丙种球蛋白的抗0体,即抗抗0体,一旦再***丙种球蛋白,就会被抗抗中和,不能发挥其抗病作用。


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