HRP-山羊抗小鼠Ig Kappa轻链的行业须知「博特龙」
作者:博特龙2022/1/14 5:29:56






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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。



实验步骤:

1 、首先将ELISA***盒***室温(大约30分),然后用纯水把清洗液配成工作浓度(1份浓缩清洗液加19份纯水)。

2 、取出酶标板。每个标本需要6孔,阳性对照6孔,阴性对照6孔。多余的用自封袋保存,记得放入干燥剂。

3 、将标本检测孔每孔先加入标本稀释液各50μl。然后将50μl 细胞培养上清(或特异亲和纯化的抗0体)再加入酶标微孔板,每个标本加6孔;阳性对照和阴性对照孔不加标本稀释液也是各加6孔每孔100μl。贴上封板膜37℃温育30分钟。


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取血:

免0疫一周后,可以耳动脉取血检测抗0体效价。因为起初几次免0疫产生的抗0体的效价比较低,头两次取血,够检测用即可。在三次免0疫后,可以获得较高0效价的抗0体,每次取血量可以在40ml,不要取太多,否则会造成兔子贫0血。

前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血,室温过夜析出血0清。

***后一次取血可以采用颈动脉放血,具体操作如下:

1、家兔仰卧于兔架上固定头部,用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。

2、沿颈部中线用***刀切开皮肤约10cm,分离皮下结缔***,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作,如碰到小血管出血,可用止血钳止血)。

3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松***,暴露出颈总动脉后用弯头眼0科镊使之游离,剥离***和结缔***。

4、于动脉下套入两根黑丝线,分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。

5、用小拇指垫在血管下,用尖头眼0科***剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断),插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上,以防放血管滑脱。

6、松开止血钳,使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。

单克0隆抗0体的大量制备

单克0隆抗0体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。

1、体内诱生法 取Balb/c小鼠。

首先腹腔***0.5ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克0隆抗0体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注0射器抽取腹0水,即可获得大量单克0隆抗0体。

2、体外培养法

将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克0隆抗0体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克0隆抗0体。但这种方法产生的抗0体量有限。近年来,各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗0体的生产量。











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