1.运输、储存和有效期
常温运输(勿超过 30℃),2-8℃储存。正常储存条件下自生产之日起有效期 2 年。
2.操作方法
将标本与本产品室温孵育 10 分钟后,用 Tris 或 PBS 冲洗。
3.注意事项
内源性碱性活性在很多细胞和***中很强,如膀胱上皮细胞、卵0巢固有层、shen脏和唾液腺。小0肠碱性磷酸酶常见于在小0肠上皮细胞的刷状缘;人0胎0盘的碱性磷酸酶常见于胎0盘合体滋养层细胞的微绒毛;在细胞涂片中,碱性磷酸酶见于嗜中性分割细胞,嗜中性带细胞,和嗜中性晚幼粒细胞。碱性磷酸酶也见于慢性和急性粒细胞白0血病以及某些嗜中性粒细胞白0血病反应。
本***盒不提供的***
1. 一抗
2. 洗涤液
3. 过氧化物酶底物
4. 去离子水或蒸馏水
5. 内源性过氧化物酶***0剂
6. 封固剂
7. 其它:显微镜、玻片、盖玻片、加样器、试管、湿盒
溶液配制
1. 1×洗涤缓冲液:将 10× 洗涤缓冲液用蒸馏水进行 10 倍稀释(例如 5 ml 浓缩洗液 + 45
ml 蒸馏水)
2. 0.3% H2O2 无水甲0醇: 加 0.3% H2O2 无水甲0醇于***切片上,室温孵育 30min, 在洗
涤缓冲液中润洗 10~15min。
操作步骤
石蜡切片
1. 脱蜡:二甲0苯,室温,2 次,每次 5~10min。
2. 水合 100%、100%、95%、90%、80%、70%乙醇、蒸馏水,每级 3min。
3. 在洗涤缓冲液中润洗 10min。
4. 如有必要,封闭内源性过氧化物酶(含 0.3% H2O2 无水甲0醇)
5. 继续通用步骤。
冰冻切片
1. 空气中干燥切片,至少 1hr
2. 用前用合适的固定液固定,如果要延长保存时间,固定后在空气中干燥 1hr。 单独包装在铝箔袋中,–70°C 干燥保存,用前从冰箱取出,室温放置至少 1hr。
3. 浸入洗涤缓冲液中 10~15min。
4. 如有必要,封闭内源性过氧化物酶(含 0.3% H2O2 无水甲0醇)。
5. 继续通用步骤。
注意事项
1. 用辣根过氧化物酶时不要使用含有叠氮钠的***。
2. 避免使用含次氯酸的去污剂。
3. 设阳性对照、阴性对照和***对照。
4. 不要使用卵清蛋白作为切片粘连剂,使用明胶或多聚赖氨酸。
5. 孵育过程中不要使片子干掉。
6. 洗涤后洗涤液尽量去净。
7. 用低熔点石蜡以减少抗原变性(> 60°C)。
8. 用新鲜配制的 4%缓冲多聚甲醛可更好保存抗原活性。
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