冻存细胞复苏步骤

1. 从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴槽中快速解冻。

2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后，将其中的混合液移至离心管中，1000rmp，5分钟离心收集冻存细胞沉淀，移去上清液（操作时 小心，切勿将细胞沉淀移去）。

3. 加入适量的新鲜细胞培养基，使用移液管缓缓加入到细胞沉淀，轻柔地混匀，将细胞混合液移至事先准备好的培养容器中。

4. 镜检细胞后，可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。

复苏细胞：

1.   将细胞冻存管由液态氮中取出，置于37度水浴快速溶解回温。此时可准备培养基、无菌15ml离心管、培养瓶。

2.   于生物安全柜内，直接以少量培养基反复冲融，使细胞团块化冻。

3.   先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基，再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g，3分钟离心收集细胞。

4.   倒去上清液，以新鲜培养基重悬细胞，移到培养瓶中培养。

5.   隔天更换新鲜培养基，并观察细胞存活状况。

原位复苏方式：

1、从冰箱取出冻存培养板，立即放入37℃水浴槽中快速解冻。

2、待冻存的细胞悬液完全融化后，轻轻吸去细胞冻存液，按照常规换液操作加入新鲜培养基继续进行培养。

细胞冷冻保存方法

冻存管冻存方式：

1、按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。

2、按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。（参考：5×105至5×106cells/ml）。

3、取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞（参考离心条件：1,000~2,000 rpm，4℃，3~5 min）。移去离心管中的上清液。

4、加入适量无血0清细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度为5×105至5×106 cells/ml。缓慢混合均匀，制成细胞混合液。

5、将离心管中的细胞混合液分装于已标示的冷冻保存管中建议每管1ml或1.5ml。。

6、直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，冷冻保存。