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取血:
免0疫一周后,可以耳动脉取血检测抗0体效价。因为起初几次免0疫产生的抗0体的效价比较低,头两次取血,够检测用即可。在三次免0疫后,可以获得较高0效价的抗0体,每次取血量可以在40ml,不要取太多,否则会造成兔子贫0血。
前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血,室温过夜析出血0清。
***后一次取血可以采用颈动脉放血,具体操作如下:
1、家兔仰卧于兔架上固定头部,用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。
2、沿颈部中线用***刀切开皮肤约10cm,分离皮下结缔***,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作,如碰到小血管出血,可用止血钳止血)。
3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松***,暴露出颈总动脉后用弯头眼0科镊使之游离,剥离***和结缔***。
4、于动脉下套入两根黑丝线,分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。
5、用小拇指垫在血管下,用尖头眼0科***剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断),插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上,以防放血管滑脱。
6、松开止血钳,使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。
血0清的分离
如果用三角瓶或平皿盛血,将器皿倾斜放置于37oC烘箱2hr,转移到4oC沉淀过夜,第二天早上用吸管吸取血0清。如果用离心管收集,37oC烘箱放置2hr,转移到4oC沉淀过夜,第二天早上离心,10000RCF,10分钟。在血0清中加入NaN3 至终浓度0.02%,分装后-20oC保存。
小结:抗血0清获得之前要件的抗0体的效价、抗0体的特异性以及抗0体的亲和力;获得抗血0清之后,要分装保存抗血0清,一般情况下,-20度可保存数月至数年抗0体的效价都不会发生变化。抗0体的效价可以通过琼脂扩散试验和酶联免0疫吸附试验进行鉴定。
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