由于改良免0疫法只需二次基础免0疫而常规免0疫法则需要2倍于改良法的免0疫次数，所以改良法抗原用量明显少于常规法，从而大大减少了实验成本的消耗。

此外，本实验通过对比两种免0疫方法的细胞融合率及抗0体阳性率，发现改良免0疫法均显著高于常规免0疫法。

经过后续实验，证明改良法免0疫小鼠的杂交瘤细胞经二次克0隆化后，抗0体阳性率可达检测孔的90％以上。杂交瘤细胞体外连续传代培养，并冻存复苏后仍具有分泌AFP—McAb的能力，并经染色体计数结果表明已成功获得一株AFP—McAb细胞株。这表明改良法与常规方法具有同样的有效性和稳定性。

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抗原制备及纯化

抗原制备: 参照文献［10］制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的，37 ℃ 培养过夜，次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养，当菌液 OD600达 0． 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG，37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验，有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG，37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品，超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化，考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ，可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。

作用机制：

佐剂增强免0疫应答的机制可能有：①改变抗原物理性状，延长抗原在机体内的存在时间和保持对免0疫系统的持续激0活作用，佐剂中的矿物油成分主要起缓释作用，有利于抗原在体内缓慢释放，延缓抗原在体内降解，从而更有效地刺激免0疫系统。②使抗原易被巨噬细胞吞噬，刺激单核巨噬细胞系统，增强其对抗原的处理和呈递抗原的能力。③促进淋巴细胞的增殖、分化，从而扩大和增强机体的免0疫应答的效应。