哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。
将外源DNA 导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类,即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微***、电穿孔、脂质体介导的转染,以及***近出现的以高分子聚合物为载体的***传递技术。生物方法则主要是以病毒作为载体,通过病毒感0染的方式将外源DNA 导入到细胞中, 其中以逆转录病毒及腺病毒转染系统***为常用。
转染***是一种新型高1效的阳离子聚合物。它可以与核酸(包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸)相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内,适用于大部分真核细胞的细胞转染。
转染效率较高,ABclonal 选取多种常见细胞系(包括 HEK293T、HCT116、HeLa、A549、C6、HEK293F 等),分别使用 HighGene 转染***和市面常规转染***产品进行细胞转染
1.以 24 孔细胞板转染实验为例,推荐一次(即每孔)转染的低内毒0素质粒 DNA 用量为 1~2μg、转染***用量为 3~5μl(请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告***进行优化),质粒和转染***可用无菌生理盐水稀释。
2.QuickShuttle 经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试,虽然在实验中推荐使用 DMEM,但有实验结果表明 M199 能够显著增强 QuickShuttle 对 Vero 细胞和 293FT 细胞的转染效果,因此可尝试使用不同培养基对转染条件进行优化。
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将上述复合物直接加入到细胞培养基中,轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。备注:转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。在极0少情况下会出现贴壁细胞脱落现象,可先从待转染细胞孔中吸取 500μl 培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。若在细胞瓶中进行转染,直接加入到无细胞贴壁的对面或侧面并摇匀即可。
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