转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。DNA转染技术的发展对现代分子生物学产生了巨大的影响。***转染技术不仅是研究转0***和***表达的重要工具,而且是***治0疗的关键步骤。理想的***转染***应该具有如下特点:高0效转染;安全;低细胞毒性;方法简单;省时、经济。
转染***简介:
其中病毒载体的特点是整和效0率高, 可使外源***在宿主细胞中长期表达,缺点是存在潜在的安全***性。电穿孔法及显微***法的特点是转染率较高,缺点是需要昂贵的仪器,前者对细胞的损伤较大,后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地***,不适合大量细胞研究的需要。
人们一直在寻找更有效、毒性小同时对研究影响也小的转染***。由于脂质类转染***对细胞的毒性是由其脂质特性决定的,众多的研究者和生物公司将新一代转染***的开发聚焦在非脂质体的聚合物上,并已有一些优0秀的***产品上市。
磷酸钙在良好的转染条件下,可以在293T等细胞的转染达到较高的转染效率。但磷酸钙转染有一个突出的问题,非常不稳定,尤其受PH值的影响非常大,在实验中使用的每种***都必须小心校准,保证质量,因为甚至偏离***优条件十分之一个PH都可能导致磷酸钙转染的失败,经常即使***熟练的转染实验者也不能保证每次磷酸钙转染的成功,他们可能经常为莫名其妙的转染失败而沮丧。同时,他们还经常发现,往往小体积的转染比如6孔板以下的转染效果比较理想,可一换到大皿,经常转染效率下降很快。磷酸钙的先天缺陷往往是实验梗阻的主要原因。
已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起***表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如***ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15);转染siRNA造成脱靶效应等等。细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小,脂质体这些作用是造成细胞毒性的根本原因。这会对相关研究数据产生严重的干扰,甚至影响研究的结论。这已引起了许多研究者的注意。