结 果

一、两种免0疫方式小鼠血0清效价比较

对两组试验动物在完成了基础免0疫后，尾静脉采集少量血液，分离血0清，进行间接ELISA测定抗0体效价，检测结果见图1。由图中数据可知，新的改良免0疫方法，在第二次免0疫后，抗0体效价即达到1：104。两组数据经生物学统计软件SPSS(Windows 13．0版)进行t检验，统计结果差异极显著(P(0．001)。

二、两种免0疫方式小鼠融合率比较

在细胞融合后约7～10 d可见孔内杂交瘤细胞生长，当细胞融合成片达孔底面积的35％～50％时，用ELISA检测特异性抗0体。两组免0疫小鼠细胞著。改良法耗费时间短，但获得的抗0体效价更高。

杂交瘤细胞的筛选与克0隆

细胞融合后，培养于添加了 HAT 的选择培养基的 96 孔板中，培养一天后半定量换液，培养基更换时应注意轻缓，第 5 天能在显微镜下看到明显的杂交瘤细胞克0隆，第 7 天左右，杂交瘤细胞能长至铺满孔底约 1 /10。此时进行 ELISA 检测养心细胞孔。取细胞培养上清对 MRJ 融合蛋白进行间接 Elisa检测，筛选出能分泌抗0体的杂交瘤细胞孔，有限稀释法对阳性孔进行亚克0隆，经过 3 次亚克0隆后，获得了能够稳定 分 泌 抗 MRJ 融合蛋白单克0隆抗0体的细胞株。对杂交瘤细胞株按从 96 孔板-24 孔板-10 cm 培养皿的顺序扩大培养，部分细胞用于腹0水制备单抗，部分细胞冻存备用。

原理

新型乳剂是一种具有自主知识产权、独0特配方的新型油包水佐剂，用于免0疫小鼠和家兔等实验动物以制备单、多克0隆抗0体。该佐剂以弗氏不完全佐剂为基础，添加了多种具有强免0疫刺激0活性的TLR配体。新型佐剂与常规使用的弗氏佐剂相比，具有以下优点：

（1）新型乳剂活性强于弗氏不完全佐剂；

（2）与弗氏完全佐剂不同，不含有干扰免0疫应答的无关蛋白成分；

（3）安全性好，副反应率低；

（4）免0疫针次少、抗原用量低等多方面优点。