液相色谱仪在生物制药中的应用

液相色谱仪是近几十年发展起来的一种、快速的分离分析技术，是现代分离检测的重要工具。液相色谱仪是以经典液相色谱仪为基础，引入气相色谱仪的理论和实验方法，将流动相改为高压输送，采用固定相和在线检测等手段，发展而成的分离分析技术，具有高压、高速、、高灵敏度、高选择性和应用范围广等特点，成为生物制药领域发展快、应用的现代分析技术之一。

液相色谱柱外界因素影响

色谱是一种分离分析手段，分离是，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10μm等，柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效；对于同系物分析，只要500即可；对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。

柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构（尽可能减少填充床以外的死体积）及装填技术。即使好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。

液相色谱柱性能评价

色谱柱的性能除了与固定相性能有关外，还与填充技术有关。在正常条件下，填料粒度>20μm时，干法填充制备柱较为合适；颗粒<20μm时，湿法填充较为理想。填充方法一般有4种：①高压匀浆法，多用于分析柱和小规模制备柱的填充；②径向加压法，Waters；③轴向加压法，主要用于装填大直径柱；④干法。柱填充的技术性很强，大多数实验室使用已填充好的商品柱。

气相色谱检测器详细介绍 

检测器基本原理： 从离子交换柱里下来的 带有分离出来组分的载气商品流通过检测器而造成数据信号，检测器的输入输出数据信号历经转换后变成色谱。 

检测器有几种种类，但检测器的作用全是一致的： 当纯的载气（沒有待分离出来组分）， 流过检测器时，造成平稳的电子信号——基准线 当尚需分离出来组分根据检测器时 造成差异的数据信号 气象色谱仪检测器类型多种多样，有很多种归类： ①依据对被检验试品的回应范畴能够被分成： 通用性检测器：对绝大部分检验愚昧均有回应，如：TCD、PI。 挑选型检测器：对某一类化学物质有回应，对其它成分的无响应或不大，如：FPD。 ②依据检测器的检验方法不一样还可以分成： 浓度值型检测器：测量的是载气中某组分浓度值一瞬间的转变，即检测器的响应值和组分的浓度值成正比，如TCD、PID。 化检测器：测量载气中某组分单位时间内进到检测器的成分转变，即检测器的响应值和单位时间内进到检测器某组分的品质成正比，如FID、FPD。