液相色谱仪

四元低压梯度的混合比例是通过控制不同流路的电磁阀的开闭时间长短来控制的，理论上混合的比例也是准确的，但是实际上电磁阀的开闭会有一个延迟，无论它动作多么快，总还是需要一点时间的。比如A路和B路各50%混合，在单位时间内，A路和B路的电磁阀各开通50%的时间，这时问题不大，电磁阀的延迟影响可以通过调整补偿系数来尽量弥补。但是如果一点的情况，A路99%，B路1%，这种情况下单位时间内，A路的电磁阀开通99%的时间，B路只占1%，时间是很短的，这时B路电磁阀的延迟就影响很大了，甚至可能延迟的时间比工作的时间还要长，而高压梯度就不会存在这种问题。

液相色谱HPLC是如何工作的？

在柱层析中，溶剂在重力作用下滴入装有吸附剂的色谱柱中。液相色谱是一种改进的柱色谱。在高达400个大气压的高压下，泵输送溶剂通过色谱柱。柱吸附剂或固定相通常是由固体颗粒（如二氧化硅或聚合物）制成的颗粒材料。

与柱色谱相比，利用泵输送，不仅可以快速分析，而且可以使用更小的颗粒作为柱填料。粒子越小，其表面积更大，通过固定相与流动相及样品组分之间的相互作用，可以更好地实现混合物中各组分分离。流动相通常是溶剂（如水、、）的混合物。

混合物的组分由于与吸收剂颗粒的相互作用的程度不同而彼此分离，在此过程中不同组分的洗脱速率不同，从而导致组分流出色谱柱时分离。与柱色谱相比，液相色谱自动化程度高，灵敏度高。

液相色谱仪常见故障解决方案

自检时，为什么有时会出现“钨灯能量低”的错误？

一般来说，原因是系统中有挡光物，光路偏离，钨灯电源系统或钨灯灯泡已坏。这时首先要检查光度室是否有挡光物；打开检测器光源室盖，检查灯是否点亮；如果灯不亮，则关机，更换新灯，换时，需注意型号；检查灯***丝，看是否松动、氧化、烧断；如果故障，应立即更换；再开机重新自检；若仍出现上述故障，则重新安装软件后再进行自检。

液相色谱柱知识

物理性质：

柱长，内径，如250*4.6mm。一般柱长在2—250mm，柱越长，分离度越高，但柱压更高，分离所需时间更长；但分离度与理论塔板数的平方根成正比，所以一昧增加柱长并不是有效的分离手段，一般情况下，150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。

粒径，影响色谱分离度。粒径越小，分离越快，柱效越高，但柱压力越高，柱容易被污染，导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料，复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径，更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍，因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。本文来源于国内的第三方检测平台嘉峪检测网，提供检测实验、技术培训、仪器计量校准服务。

孔径，60A，120A，300A等。孔径小，则含孔率高，比表面积大，载碳量高；色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配，保证分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配，通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。

颗粒形状，一般有球形和不规则形，当使用黏度较大的流动相时，球形颗粒可以降低柱压，延长色谱柱寿命。

比表面积，指的是每克填料的表面积，如180m2/g—350m2/g，与粒度和含孔率有关；比表面积大，会增加样品与键合相之间的反应，增加保留和分离度；比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间，并不是比表面积大或者小就更好，需要选择合适的比表面积。