液相色谱法概述

HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其以液体作为流动相，并采用颗粒极细的固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性，从而使不同样品得到分离。

液相色谱

HPLC对流动相的一般要求

流动相就比如***的血液，其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。

应该使用HPLC级的溶剂，不能互相混溶的溶剂不可以直接切换!一般在水相和与其不混溶的溶剂切换时，使用异作为过渡溶剂。

注意溶剂的截止波长。截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器中使用的低波长,低于该波长后,溶剂会有很强的紫外吸收，从而影响极限的稳定性、干扰对所分析物质的检测。

HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的。建议每天更换新鲜的水。长期不用时，必须把使用水的管路用置换，防止长霉。

仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。

仪器长期不用时，不建议使用纯封存。因为有生成聚合物的趋势。建议使用、/水或/水封存。

当有流路堵塞时，可以尝试将之反接后冲洗。污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命，并且影响泵和系统的的性能。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液(pH 4 至7) 中尤其如此。

正相液相色谱

柱内填充有微小的二氧化硅颗粒和非极性溶剂，例如正己烷。典型柱的内径为4.6 mm或更小，长度为150至250 mm。混合物中的非极性化合物通过色谱柱的速度更快，因为极性化合物比非极性化合物在极性二氧化硅上的粘附时间更长。

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反相液相色谱

柱内填充二氧化硅颗粒，并对其进行改性，通过将长的碳氢链（8～18个C原子）附着在其表面来实现其非极性。使用极性溶剂，例如水和醇的混合物，。由于极性溶剂和混合物中的极性分子之间具有强烈的吸引作用，混合物中的极性化合物将更快地通过色谱柱。非极性分子在通过色谱柱的过程中速度会减慢。它们主要通过范德华分散力和疏水作用与烃基形成不同程度的吸引力。它们在水流动相组分中的可溶性也较低，有助于它们与烃基的相互作用。