抗l体的层析分离步骤基本
都可以采用标准化的三步曲:步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩;第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体,宿主蛋白等杂质;第三步是精纯去除剩余DNA,Endotoxin,Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中,步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上,也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因:首先是Protein A 价格昂贵,其价格是普通层析介质十几倍;第二,Protein A使用寿命短,一般离子交换填料使用寿命多达1000次,而亲和填料寿命通常在100-200次;第三,Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩,需要处理大体积的发酵液,而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析,使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此,要降低抗l体的生产成本,解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。
层析填料交换分离
离子交换层析根据化合物的净电荷进行分离。带负电荷或正电荷的官能团共价结合于固相载体基质,分别成为阳离子交换剂和阴离子交换剂。当一个带电荷的分子加入到带有相反电荷的交换剂时,它就会被吸附,同时,带相同电荷的离子和中性分子则被洗脱到层析柱的外水体积里。带电荷分子的结合是可逆的,通常可用盐或PH梯度洗脱吸附的分子。 离子交换层析可以有多种应用,包括分离和纯化生物分子,分离无机离子,***和水的去离子化,盐转换以及去除金属离子、化乙锭和SDS。 化合物的分离策略。如果分子在PH高于其等电点时稳定,可使用阴离子交换树脂。如果分子在PH低于其等电点时稳定,则使用阳离子交换树脂。
如何选择层析填料
按照层析技术原理分类选择填料:凝胶过滤填料选择、离子交换填料选择、亲和填料选择、疏水填料选择、反相填料选择
层析工艺不同阶段选择填料的一般规律根据目的物的性质选择填料
根据目的物的性质选择填料
根据规模选择合适的层析预装柱层析空柱选择
层析空柱选择
特点:结合了Sephadex的高选择性和琼脂糖的高物理稳定性,机械稳定性好,高分辨率高化学稳定性
版权所有©2024 产品网