液相色谱仪
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统
液相色谱法概述
液相色谱根据分离机理的不同可分为:
?液固吸附色谱
?液液分配色谱
?离子交换色谱
?离子对色谱法
?分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)
(一)液-固吸附色谱
流动相为液体,固定相为固体吸附剂,根据物质吸附作用的不同来分离物质。
(二)液-液分配色谱
流动相和固定相都是液体的色谱法即为液-液色谱,是利用样品组分在两种不相溶的液相间的分配来进行分离。一种液相为流动相,另一种是涂于载体上的固定相。
流动相极性小于固定相极性的液-液色谱法称为正相分配色谱法。
流动相极性大于固定相极性的液-液色谱法称为反相分配色谱法。
(三)离子交换色谱
(四)离子对色谱法
(五)分子排阻色谱法
液相色谱
HPLC对流动相的一般要求
流动相就比如***的血液,其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。
应该使用HPLC级的溶剂,不能互相混溶的溶剂不可以直接切换!一般在水相和与其不混溶的溶剂切换时,使用异作为过渡溶剂。
注意溶剂的截止波长。截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器中使用的低波长,低于该波长后,溶剂会有很强的紫外吸收,从而影响极限的稳定性、干扰对所分析物质的检测。
HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的。建议每天更换新鲜的水。长期不用时,必须把使用水的管路用置换,防止长霉。
仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。
仪器长期不用时,不建议使用纯封存。因为有生成聚合物的趋势。建议使用、/水或/水封存。
当有流路堵塞时,可以尝试将之反接后冲洗。污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命,并且影响泵和系统的的性能。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液(pH 4 至7) 中尤其如此。
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