液相色谱法概述

液相色谱法自20世纪60年代问世以来，由于使用了高压输液泵、全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器，实现了对样品的高速、和高灵敏度的分离测定。液相色谱由于吸取了经典液相色谱的研制经验，并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度。现在用微处理机控制的液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了、功能齐全的分析工具。

液相色谱的基本原理

液相色谱基本原理是分离度(也叫分辨率)正比于

四分之理论塔板数n的平方根乘以

选择因子a比上a-1再乘以

分离因子k+1比上k

我认为分离度和这些变量是正比关系而不是准确的等于，如果非要说是等于的关系，再加上一个常数可能会更合理。

n和柱长(正比)、粒径(反比)、固定项填料(全多孔硅胶型，表面多孔/核壳型)有关

a和流动相种类(反向色谱：和)、pH(2到9)、柱温有关

分离因子/保留因子(平衡状态下，固定相中含量与流动相中的比值)和流动相种类、流动相比例、柱温、固定相填料有关

正相液相色谱

柱内填充有微小的二氧化硅颗粒和非极性溶剂，例如正己烷。典型柱的内径为4.6 mm或更小，长度为150至250 mm。混合物中的非极性化合物通过色谱柱的速度更快，因为极性化合物比非极性化合物在极性二氧化硅上的粘附时间更长。

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液相色谱法可以不做标准曲线吗？

首先要明确做标准曲线的目的，一般是为了含量测定作为标准品来用。液相色谱的浓度和峰面积成正比，样品的含量未知，浓度也就未知，峰面积可读。那么这时需要一个已知含量和已知峰面积的对照品。这个时候做不做标准曲线要看试验方法，有的方法是外标法，也就是和你样品浓度一样的对照品，平行配制两个，进样分析。有的方法是内标法，就需要样品中添加内标物。还有的面积化，那就什么对照都不要进了。方法要看你的质量标准，上面应该有计算方法，上面写的是什么，就按照什么来做。不是非标准曲线不可的。