叶子中的色素提取可以用分离色素(纸层析法): 不同色素在层析液中的溶解度不同,溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快,反之则慢,从而使各种色素相互分离。
叶子中的色素,即提取叶子中叶绿体来中的色素。
抗l体的层析分离步骤基本
都可以采用标准化的三步曲:步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩;第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体,宿主蛋白等杂质;第三步是精纯去除剩余DNA,Endotoxin,Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中,步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上,也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因:首先是Protein A 价格昂贵,其价格是普通层析介质十几倍;第二,Protein A使用寿命短,一般离子交换填料使用寿命多达1000次,而亲和填料寿命通常在100-200次;第三,Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩,需要处理大体积的发酵液,而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析,使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此,要降低抗l体的生产成本,解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。
选择层析方法
用分离范围宽广的凝胶过滤介质如Superose, Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份
用含专一配体或的亲和层析介质结合目标蛋白,一步即可得到高纯度样品;亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质
体积大的样品,往往使用离子交换层析来浓缩和粗纯化;高盐洗脱的样品再用疏水层析纯化
疏水层析用高盐吸附,低盐洗脱的原理,洗脱的样品又可直接上离子交换介质;两种方法常被交替使用
锥形封头一种负压层析设备,它包含:圆柱体上方设有快开启式紧锁卡紧的上锥形封头和上锥形卡套式接头互相卡接,上锥形封头上端设有负压插口经负压阀、气液分离设备与负压泵相接,圆柱体下方设有快开启式紧锁卡紧的下锥形封头和下锥形卡套式接头互相卡接,下锥形封头下边设有进液插口经进液管路与三通阀体上端的排液接口相连,三通阀体下边各自设有2个与进液管路连在一起的进液插口。本产品给予一种应用量少、分离出来、速度更快、周期时间短,构造简易,,没有噪音,节能型,易实际操作,一次分离出来纯净度可以达到98%之上的负压层析设备。
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