液相色谱法

液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80% 则需用液相色谱来分析。HPLC因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生***学、及临床分析，己将该法收载于药典。

液相色谱常见问题

在日常工作中，遇见液相色谱仪哪些异常情况？又是如何解决的？

峰的问题：峰前沿，峰重叠，峰拖尾，鬼峰，基线漂移。

压力问题：超压，低压，压力波动。

硬件问题：日常损耗，零件损坏。

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为什么液相色谱适合分析低沸点化学物质？

这个说法不能理解成液相色谱不适合分析高沸点物质。

其实这是因为气相色谱一般需要对物质进行加热，然后根据汽化温度（沸点）不同，物质先后进入检测器。检测器一般是氢火焰检测器为主。

如果一个物质沸点太低，那么很容易出峰非常快，和溶剂出在一起，在谱图前端，根本看不出来（如果你看过气相色谱图你就知道了）。

此时就需要用HPLC，因为HPLC分开物质依据的是物质和色谱柱填料的亲和力强弱，而不是沸点。

举个例子，如果我想要知道我一个样本中是否含有（沸点85℃），用气相色谱是非常困难的。因为沸点100℃以下的物质在GC里面出峰是极度困难的。

但是我如果用HPLC配合反相柱，此时就可以看得出来。

多说一点，实际上还有一些情况我不能用HPLC来分析，就是当一个化合物极性非常大或者极性非常小，此时我无论用正相色谱柱还是反相色谱柱，都会有一个问题，就是我的化合物要么出在前面和溶剂在一起，要么根本出不出来。

比如咪唑，咪唑的亲水性太强，我经常在HPLC反相柱里面分离不开，此时一般我要分析，就会借助GC（沸点256℃）

液相色谱柱知识

物理性质：

柱长，内径，如250*4.6mm。一般柱长在2—250mm，柱越长，分离度越高，但柱压更高，分离所需时间更长；但分离度与理论塔板数的平方根成正比，所以一昧增加柱长并不是有效的分离手段，一般情况下，150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。

粒径，影响色谱分离度。粒径越小，分离越快，柱效越高，但柱压力越高，柱容易被污染，导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料，复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径，更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍，因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。本文来源于国内的第三方检测平台嘉峪检测网，提供检测实验、技术培训、仪器计量校准服务。

孔径，60A，120A，300A等。孔径小，则含孔率高，比表面积大，载碳量高；色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配，保证分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配，通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。

颗粒形状，一般有球形和不规则形，当使用黏度较大的流动相时，球形颗粒可以降低柱压，延长色谱柱寿命。

比表面积，指的是每克填料的表面积，如180m2/g—350m2/g，与粒度和含孔率有关；比表面积大，会增加样品与键合相之间的反应，增加保留和分离度；比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间，并不是比表面积大或者小就更好，需要选择合适的比表面积。