液相色谱法概述

液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

液相色谱

GC与LC的比较

由于HPLC分析不受温度和样品沸点限制，因此具有更广阔的应用潜力。经过30多年的迅速发展，液相色谱法在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟，现已成为化学化工、环境、药学、食品等多个领域中具优势的分离分析方法之一。

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液相色谱HPLC是如何工作的？

在柱层析中，溶剂在重力作用下滴入装有吸附剂的色谱柱中。液相色谱是一种改进的柱色谱。在高达400个大气压的高压下，泵输送溶剂通过色谱柱。柱吸附剂或固定相通常是由固体颗粒（如二氧化硅或聚合物）制成的颗粒材料。

与柱色谱相比，利用泵输送，不仅可以快速分析，而且可以使用更小的颗粒作为柱填料。粒子越小，其表面积更大，通过固定相与流动相及样品组分之间的相互作用，可以更好地实现混合物中各组分分离。流动相通常是溶剂（如水、、）的混合物。

混合物的组分由于与吸收剂颗粒的相互作用的程度不同而彼此分离，在此过程中不同组分的洗脱速率不同，从而导致组分流出色谱柱时分离。与柱色谱相比，液相色谱自动化程度高，灵敏度高。

正相液相色谱

柱内填充有微小的二氧化硅颗粒和非极性溶剂，例如正己烷。典型柱的内径为4.6 mm或更小，长度为150至250 mm。混合物中的非极性化合物通过色谱柱的速度更快，因为极性化合物比非极性化合物在极性二氧化硅上的粘附时间更长。