抗l体的层析分离步骤基本

都可以采用标准化的三步曲：步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩；第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体，宿主蛋白等杂质；第三步是精纯去除剩余DNA，Endotoxin,Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中，步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上，也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因：首先是Protein A 价格昂贵，其价格是普通层析介质十几倍；第二，Protein A使用寿命短，一般离子交换填料使用寿命多达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次；第三，Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩，需要处理大体积的发酵液，而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析，使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此，要降低抗l体的生产成本，解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。

纳微疏水层析以单分散高交联PMMA或PS/DVB亲水改性微球为基质，通过领i先的键合技术将ben基和丁基水基团固定在基质表面，在高盐条件下吸附生物分子，低盐下洗脱，具有吸附载量和低非特异性吸附，非常用于离子交换色谱过程之后产品的继续分离纯化。

采用单分散微球填料，批次间稳定性更佳

的表面键合技术，更高的动态载量

填料装柱压缩系数远低于琼脂糖和葡聚糖凝胶

更全的填料规格，提供客户定制化服

机械强度高，反压更低，提高生产效率

层析填料的用途

用作固定相的有硅胶、活性炭、氧化铝、离子交换树脂、离子交换纤维等，或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体，也可使用其他物质。将作为固定相的微细粉末状物质装入细长形圆筒中进行的层析称为柱层析（column chromatogra-phy），在玻璃板上涂上一层薄而均的物质作为固定相的称为薄层层析（thin-layer chromatography），后者可与用滤纸作为固定相的纸上层析进行同样的分析，即在固定相的一端，点上微量试料，在密闭容器中，使移动相（液体）从此端渗入，移动接近另一端。通过这种展开操作，各成分呈斑点状移动到各自的位置上，再根据Rf值的测定进行鉴定。当斑点不易为肉眼观察时，可利用适当的显色剂，或通过紫外灯下产生荧光的方法进行观察。也可采用在种移动相展开后再用另一移动相进行展开（这时的展开方向应与原方向垂直），使各成分分离完全的双向层析（two-dimensional chromatography）。

选择层析方法

用分离范围宽广的凝胶过滤介质如Superose, Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份

用含专一配体或的亲和层析介质结合目标蛋白，一步即可得到高纯度样品;亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质

体积大的样品，往往使用离子交换层析来浓缩和粗纯化;高盐洗脱的样品再用疏水层析纯化

疏水层析用高盐吸附，低盐洗脱的原理，洗脱的样品又可直接上离子交换介质;两种方法常被交替使用