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液相色谱法概述

HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其以液体作为流动相，并采用颗粒极细的固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性，从而使不同样品得到分离。

液相色谱仪常见故障解决方案

液相色谱柱压升高的原因是什么？

造成柱压升高的原因很多。一般是由于柱床内产生了异常的占位性物体，造成流体阻力加大所引起的。例如，缓冲液盐分如(铵等)沉积于柱内，或样品污染沉积。针对种情况，处理时应先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯冲洗柱子30分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成冲洗，接着用+异(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再用换成冲洗，然后用纯水冲洗，冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

为什么液相色谱适合分析低沸点化学物质？

这个说法不能理解成液相色谱不适合分析高沸点物质。

其实这是因为气相色谱一般需要对物质进行加热，然后根据汽化温度（沸点）不同，物质先后进入检测器。检测器一般是氢火焰检测器为主。

如果一个物质沸点太低，那么很容易出峰非常快，和溶剂出在一起，在谱图前端，根本看不出来（如果你看过气相色谱图你就知道了）。

此时就需要用HPLC，因为HPLC分开物质依据的是物质和色谱柱填料的亲和力强弱，而不是沸点。

举个例子，如果我想要知道我一个样本中是否含有（沸点85℃），用气相色谱是非常困难的。因为沸点100℃以下的物质在GC里面出峰是极度困难的。

但是我如果用HPLC配合反相柱，此时就可以看得出来。

多说一点，实际上还有一些情况我不能用HPLC来分析，就是当一个化合物极性非常大或者极性非常小，此时我无论用正相色谱柱还是反相色谱柱，都会有一个问题，就是我的化合物要么出在前面和溶剂在一起，要么根本出不出来。

比如咪唑，咪唑的亲水性太强，我经常在HPLC反相柱里面分离不开，此时一般我要分析，就会借助GC（沸点256℃）