与Gly相比，代替His的非极性Ala或Val残基（HLHALI 和 HLHVLI）具有较低的活性，因为它们具有较高的空间位阻，这阻碍了的非极性头部与 HL 的相互作用。与 Gly 相比，极性和或带电的Ser和Glu代替 H (HLHELI) 也导致较低的活性，这可以通过Ser的极性侧链和与D冲突的Glu的负电荷来解释，这种环境使的非极性头部朝向HL的位置不稳定。 规模制备具有脂肪族 α-羟基酮裂解活性的TKgst 突变体随后在乙醇醛存在下对和裂解反应进行了制备规模的研究。


该反应条件温和，易于操作，官能团兼容性高，有广泛的底物范围和实用性。 研究背景及硼酸参与的Passerini反应以苯丙醛、异酸叔丁酯和-硼酸作为模板底物，对硼酸参与的Passerini型反应进行了条件筛选。令人高兴的是，在没有加入任何其他添加剂的情况下，将三种反应物直接在DCM中进行简单混合，就能以％的分离产率获得了所需的α-羟基酮产物。终确定了以CHCl与pH = .缓冲液:组合的混合溶剂为条件，可以得到％的目标产物分离收率。


在反应条件下，首先对醛的底物适用范围进行了考察（图），包括脂肪族醛和芳基醛。令人高兴的是，各种脂肪族醛也都能以中等到高收率适当地转化，同时反应还显示出广泛的官能团兼容性，如硝基、三氟、、酯、硫醚、卤素等能完整保持。图. 脂肪族醛和芳基醛底物范围接下来，对芳基硼酸底物范围进行了考察（图），可以扩展到、、苯并、苯并、被保护或无保护基团的、-氮杂、二苯并和等芳环骨架。