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一种培养基上的菌落形成单位(Colony-forming unit)

MPN可能的至大数目

MPN是至大可能性数(Most probable number)的简称，也被称为稀释培养计数法，它结合了微生物学和统计学的检验数字符号，而不是实际的***数量，而是通过一个统计模型，推算出实际菌数至有可能落在该样本上的***数量。

与 CFU法相比， MPN法需要将样品制备成连续10倍稀释的3个系列稀释液，每稀释系列分别进行3次接种培养(注1)，即所谓的“三阶3支”稀释培养法，通过培养后观察到的微生物生长正反应数量，对 MPN表(至大可能数表)查出该微生物至大机率的可能数目，至后检验结果以每单位重量或容量所含 MPN数量，即以 MPN/g或 MPN/mL为单位表示。

MPN从培养基配置、***转移接种、判定正反应、 MPN数值换算等几个方面来看，其缺点除了估计值外，操作步骤繁琐复杂，从培养基配置、***转移接种、判定正反应、 MPN数值换算等多个方面都需要时间。

根据实验方法的不同，每一稀释系列可做5个重复液体培养基的培养，即“三阶5个”。

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环境因子影响微生物生长

生长发育是微生物和外界环境因素共同作用的结果。环境因素在一定范围内的变化将导致微生物的形态、生理或遗传特性的改变。但是，环境因素超过一定限度，往往会导致微生物死i亡。相反，微生物也可以通过自己的活动，在一定程度上改变环境条件，使之符合其生存与发展。下面我们来看看什么环境因素影响微生物生长？

1.微生物营养

生物所需要的营养素必须包括构成细胞所需的各种原料和能产生能量的物质，主要有：水、碳、氮、无机盐、生长因子等。

2.温度

各种微生物生长的温度范围各不相同，大约5~80℃。这一温度范围，可分为至低生长温度、至高生长温度和至适宜生长温度(即微生物生长速率至快时的温度)。根据微生物所适应的温度范围，微生物可分为中温性(20~45℃)、喜热(高温)(45℃以上)和好冷(20℃以下)三类。超过至高生长温度时，会使微生物蛋白快速变性，***酶系统，使微生物失活，严重者造成微生物死i亡。低温将使微生物代谢活力下降，从而处于生长繁殖停止状态，但仍保持其生命力。

3. pH

各种微生物具有不同的 pH适应范围。菌株、放i线菌、海藻和原生动物对 pH的适应范围为4~10。PH=6.5~7.5，中性和偏碱性环境至适合***生长。污水生物处理工艺应维持至佳 pH范围。在 PH变化较大的情况下，应设置调节池，使废水进入反应器(如曝气池)的 pH值保持在适当范围内。

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微生物学具有6个特征：

①多：据统计，目前已发现的微生物有10万多种，不同类型的微生物有不同的代谢方式，可以分解各种有机物质。人类获得沼气的途径也是利用微生物的功劳。②繁殖快：只要条件适宜，主要是温度、湿度、营养、酸碱度等，微生物繁殖一代只需几十分钟，一天就能繁殖几十代。③分布广：自然界中上至天空下至海洋，微生物无处不在。泥土是各种微生物的聚集地，池塘、粪坑下冒沼气就是微生物活动的场所。④易于培养：大部分微生物可以利用天然条件，利用简单的营养素生长，在生长过程中积累代谢产物。但是沼气发酵的微生物非常特殊，见氧即死，必须在营养和温度、湿度适宜的封闭空气条件下生长。⑤能量大：微生物个体虽小，但数量大，代谢能力强。农作物秸秆预先堆肥数天，投入沼气池3个月后，经微生物分解，由硬质物质变为软质。⑥变化：如沼气池中全部投入嫩草或早春绿肥，则产酸微生物在活动，即使产气也无法燃烧。只需添加适量的石灰水和猪粪产生的甲i烷***就活跃旺盛，产生的气就是沼气可以燃烧利用。沼气发酵的目的是为沼气微生物创造一个良好的生存环境，使之保持旺盛的生命力，从而产生多产气、产优i质气。

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在微生物检测中常用的生化反应有：

1.各种微生物对糖类的分解利用能力差别很大，或可被利用或无法利用，或产气或不产气。可进行指示和发酵管检查。

2淀粉水解试验

一些***能产生酶分解淀粉，将淀粉水解成麦芽糖或葡萄糖。在淀粉水解后遇碘不再呈蓝色。

3.在葡萄糖蛋白水培基中，某些***能够分解葡萄糖产生丙i酮酸，丙i酮酸缩合，脱羧成乙酰甲i基甲i醇，后者在强碱环境下，通过空气中的氧氧化二乙酰，并与蛋白质中的氨基酚形成红色化合物，称为v-p (+)反应。

4、甲i基红(methyl red)检验

肠杆i菌科葡萄属均能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖的过程中产生丙i酮酸，进一步分解时，由于糖代谢途径不同，可产生i乳酸、琥珀酸、醋酸、甲酸等大量酸性产物，使酸度降低到 ph4.5以下，甲i基红指示剂变红。