层析柱是凝胶层析技术中的主体
层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外,直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。分族分离时用短柱,一般凝胶柱长20-30厘米,柱高与直径的比较5:1─10:1,凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1,常用凝胶柱有50×25厘米,10×25厘米。滤板下的死体积应尽可能的小,如果支掌滤板下的死体积大,被分离组分之间重新混合的可能性就大,其结果是影响洗脱峰形,出现拖尾出象,降低分辩力。在分离时,死体积不能超过总床体积的1/1000。
树脂的选择和处理
在化学分析中应用多的为强酸性阳离子交换树脂和强碱性阴离子交换树脂。使用时应当先过筛以除去太大和太小的颗拉,也可以用水泡胀后用筛在水中选取大小一定的颗粒备用。
一般商品树脂含有一定杂质,使用前必须进行净化处理。强碱性和强酸性阴阳离子交换树脂,通常用4mol/LHCl溶液浸泡1-2天,以溶解各种杂质,然后用蒸馏水洗涤至中性。如果需要钠型阳离子交换树脂,则用N***处理氢型阳离子交换树脂。
树脂未使用状态下的储存
树脂的内、外包装可有效保护树脂免受污染、损失与水分流失,如果树脂包装破损或敞开,一方面可能导致树脂外漏受污,且散落的树脂颗粒会导致地面易滑,带来树脂损失的同时,也会给现场人员的安全带来隐患(存在滑倒跌落风险);另一方面,树脂长期暴露于空气中,不但存在树脂发生物理、化学、生物污染而变质的可能,也会导致树脂表面与内部水汽蒸发,引起树脂失水,影响树脂性能的风险。因此,无论何种树脂,一旦打开包装,应尽快投入使用;未使用的树脂应重新封装保存(可使用原有包装,但须注意包装完好与洁净)。树脂储存过程中一旦发现包装破损,应及时进行包装修补或倒换包装。
需要特别注意的是,一旦发现树脂因失水而变得干燥,切不可直接用水进行润湿,以免树脂快速溶胀而导致骨架断裂,产生树脂破碎。而是应该向树脂中慢慢加入浓盐水,静置1小时以上,以使树脂内、外溶液体系达到平衡,再通过连续处理的方式逐步降低盐水浓度,实现盐水的置换,后再用纯水清洗干净。对于干燥程度较高的树脂,建议可在实验室***行包括盐水浓度、加入速度、平衡时间等工艺参数的优化论证,确定工艺后再进行规模化处理。
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