坚持常规清洁工作
实验结束后应该对操作台面,仪器,实验用具及环境进行清洁,这对污染的控制尤为重要。
1、实验后所有的***按照要求进行存放,废料和废液及时清理,避免存放过多和过久,废液缸用有效氯含量为2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;
2、离心管架、试管架等可重复使用的物品浸泡到500mg/L 的消毒液中过夜,第二天用清水清洗后晾干使用;
3、对各区的生物安全柜、洁净工作台先用75%酒精或者500mg/L 的消毒液擦拭后采用紫外灯进行消毒处理;
4、配制含有效氯500mg/L的消毒液对设备表面、台面、地面、物品表面、传递窗内及门窗进行擦拭,再用纯化水对设备表面、台面、进行擦拭,避免消毒液对实验器具的腐蚀,仪器如核酸提取仪采用内部紫外消毒程序进行照射;
5、操作台面使用移动紫外消毒车近距离辐照1小时,应使灯管距离工作区的距离在60-90cm;实验室内则使用室内紫外灯整晚辐照。
pcr滤芯吸头
测试吸头需使用经校准的移液器
(1)准确性:将n个吸头分别吸取定量的纯水称重,重量与体积的关系按照1 g/mL换算。
(2)气密性:取n个吸头,吸取量程的含有1%甘油的墨水,观察有色液体不出现在滤塞之上,液面相同为合格。
(3)防气溶胶性能:取n个吸头,吸取阳性核酸,反复吹吸10次,换另一个新吸头在阴性纯水中反复吹吸10次,取阴性纯水作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。
(4)污染物质检:取n个吸头,吸取阴性纯水反复吹吸10次,取阴性纯水作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。
(5)***物质检:取n个吸头,吸取弱阳性质控物反复吹吸10次,然后进行提取;吸取RNA核酸和DNA核酸反复吹吸10次,作为模板进行扩增,qPCR扩增未被***为合格。
PCR实验室的潜在污染来源
①临床标本中存在的大量待测微生物或待测靶核酸
②科研中得到的质粒
③以前分析研究的特定微生物或靶核酸
④大量存在于实验环境中的特定微生物或靶核酸
⑤以前扩增产物的残留污染,这也是 PCR 实验室产生的将造成假阳性的“污染”。
PCR扩增可以引起实验室中扩增产物的累积,通常一次典型的PCR
扩增可以产生109拷贝的靶序列,如果气溶胶化,甚至的气溶胶都会含有106拷贝的扩增产物。如果不加以控制,在短期内累积的气溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的***、仪器设备和通风系统,从而造成严重的实验室“污染”,出现大量的假阳性结果。
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