武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
⑵在双目解剖镜下,用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥,用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥。
⑶将挑好的茎尖移到MS 10.7μmol/L萘乙1酸(NAA) 4.4μmol/L6-苄基腺票呤(6-BA)的培养基上诱导愈伤***形成,用封口膜将培养皿封好。
(4)在恒温培养箱中,26℃下,培养六周,形成愈伤***,经继代后,可用于生根培养
4.细胞上清液样本如何处理?
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(1000×g)。仔细收集上清。
5.细胞裂解液样本如何处理?
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或者超声破碎,以使细胞***并放出细胞内成份。离心10分钟左右(5000×g)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2) 激1素,包括小分子量的甾体激1素等。
3) 抗生1素和药1物。
4) 病原体抗原,HBsAg、HBeAg等。
5) 另外,也可利用纯化的抗原检测标本中的抗1体,例如抗-HBs等。
5.标记的***测定
如上所述,***测定是一种很敏感的测定方法,抗原抗1体反应后直接测定形成的沉淀或浊度,敏感度可达5~10μg/ml,但在临床检验中,某些待测物在标本中的含量远低于这一水平,因此要寻找增加敏感度的方法。标记的***测定是将检测***中的抗原或抗1体用可微量测定的物质加以标记,通过测定标记物来提高敏感度。在放1射***测定和酶***测定中,标记物分别为放1射性核素和酶,后用测定放1射性和酶活力来计算待检物的量,敏感度可比直接测定沉淀物提高数百至数千倍。在标记***测定中,一般加入过量的标记***以保证与待测物彻底反应。Ig的轻链是相同的,有κ(kappa)和λ(Lambda)两种型别。以标记抗1体(Ab ※)检测抗原(Ag)为例,反应式如下:
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗1体及酶标抗1体结合,而不再形成'夹心复合物'。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗1体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2,图1-4),如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法***测定标本中含量可异常增1高的物质(例如血1清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的1高值。用高亲和力的单克1隆抗1体制备此类***可削弱钩状效应。【自备仪器】酶1标仪,移液器【使用方法】1、待样品孔中加完HRP结合物并温育一定时间后,洗板3-5次,每孔加入底物显色液A,显色液B各50μL(A、B液先混合再加入孔中),轻轻混匀,在37°C下温育10-30分钟。
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