武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
6.***样本如何处理?
用预冷的PSB (0.01M,pH=7.4)冲洗***,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将***剪碎。将剪碎的***与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的***样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑1制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解***细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟,取上清检测。由于乙醇与石蜡不相溶,而二甲本既能溶于乙醇又能溶于石蜡,所以脱水后还要经过二甲本以过渡。
IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段,其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fab)。每个Fab都保存结合抗原的能力,但只有一个抗原结合位点,是单价的,与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称Fc段,无抗1体活性,但具有IgG特有的抗原性。
IgG可被胃蛋白酶分解为两个片段,一个Fab双体,称F(ab')2,能和两个相同的抗原结合;另一片段类似Fc,随后被分解成小分子多肽,无生物活性。
IgM是由五个单体组成的五聚体,含 10个重链和10个轻链,具有10个抗原结合价,由于空间位置的影响,只表现为五个抗原结合价。IgM分子量约为900000,IgG分子量约为150000。
但是这种特异性也不是绝1对的。假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗1体反应中可出现交叉反应。例如:绒毛膜促性1腺激1素(hCG)和黄体生成激1素(LH)均由α和β两个亚单位组成,其结构的不同处在β亚单位,而两者的α亚单位是同类的。全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟。用hCG***动物所得的抗血1清中含有抗α-hCG和抗β-hCG两种抗1体,抗α-hCG抗1体将与LH中的
α酶位发生交叉反应。在临床检验中,如用抗hCG抗血1清作为妊1娠诊1断***检定尿液中hCG,只能用于hCG浓度较高的试验,否则妇女生理性排泄入尿液中的微量LH将与之发生交叉反应。因此在作为早1孕诊断(敏感度应达到50mIu/mlhCG)的实际中必须应用只对hCG特异的抗β-hCG,以避免与其它激1素的交叉反应的发生。假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗1体反应中可出现交叉反应。
双抗1体夹心法是检测抗原1常用的方法,操作步骤如下:
1)将特异性抗1体与固相载体联结,形成固相抗1体。洗涤除去未结合的抗1体及杂质。
2)加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗1体结合,形成固相抗原抗1体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
3)加酶标抗1体,保温反应。固相***复合物上的抗原与酶标抗1体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗1体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
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