武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。

4） 吸取匀浆液到离心管，4℃ 5000×g 离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

6、 尿液、唾液等其他液体生物样本

1000×g离心20min，取上清即可检测。

总的来说，因为ELISA只能检测可溶性蛋白的含量，所以应保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应离心去除。

为了保证检测的准确性，保存于-20℃或-80℃的样本1好在1~6个月内检测；4℃保存的样本应在1周内进行检测。

另外，还应保证样本不含NaN3，因为NaN3会***HRP的活性，从而导致假阴性的结果。

3. 洗涤

材料经固定后,PBS或双蒸水冲洗约3小时。（20，30，30，60）

4. 脱水

材料依次经80%、90%、100%、100%各级乙醇溶液脱水，各30min

注意事项：

（1）脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。

（2）在更换高一级的脱水剂时，1好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

（3）在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使***变软，助长材料的解体。

（4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使***变脆，影响切片。

（5）如需过夜，应停留在80%酒精中。

假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。解离后的抗原或抗1体均能保持原有的结构和活性，因此可用亲和层析法来提纯抗原或抗1体。

　　双抗1体夹心法测抗原的另一注意点是类风1湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗1体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗1体夹心法检测的血1清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗1体和酶标抗1体结合，表现出假阳性反应。（2）在更换高一级的脱水剂时，***1好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。采用F（ab'）或Fab片段作酶结合物的***，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。双抗1体夹心法ELISA***是否受RF的影响，已被列为这类***的一项考核指标（参见6.2）。

　　双抗1体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。