武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。

1、染色过强 原因 解决办法 抗1体的浓度过高或抗1体孵育时间过长 降低抗1体滴度（一般指浓缩性抗1体）抗1体孵育时间：室温1 小时或4℃过夜 孵育温度过高，孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB 显色时间过长或 DAB 浓度过高 显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准 2、非特异性背景染色 原因 解决办法 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3×5 ***中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长 ***中含内源性生物素 正常非***动物血1清再封闭 血1清蛋白封闭不充分 延长血1清蛋白封闭时间

2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

5. 加酶：每孔加入酶标***50μl，空白孔除外。

6. 温育：操作同2。

7. 洗涤：操作同4。

8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B050μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转***）。

10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

1.3.3　特异性

抗原抗1体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗1体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗1体反应具有高度的特异性。重链和轻链的N端的氨基酸排列顺序因各种抗1体而异，称为可变区，分别用VH和VL表示。例如乙1肝1病毒中的表面抗原（ HBsAg）、e抗原（HBeAg）和核心抗1体（HBcAg），随来源于同一病毒，但仅与其相应的抗1体结合，而不与另外两种抗1体反应。抗原抗1体反应的这种特异性使***测定能在一非常复杂的蛋白质化合物（例如血1清）中测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。