武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
5. 加酶:每孔加入酶标***50μl,空白孔除外。
6. 温育:操作同2。
7. 洗涤:操作同4。
8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B050μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转***)。
10. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
【储存条件及有效期】
储存条件:2到8℃保存,避光。
有效期:12个月。
【自备仪器】
酶1标仪,移液器
【使用方法】
1、待样品孔中加完HRP结合物并温育一定时间后,洗板3-5次,每孔加入底物显色液A,显色液B各50 μL(A、B液先混合再加入孔中),轻轻混匀,在37°C下温育10-30分钟。
2、每孔加入终止液,15 min内在450 nm波长处测定各孔溶液的OD值。
7. 包埋
包埋时,用镊子夹取石蜡模子(金属质地)在酒精灯上稍加热,放在平的桌面上,从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯,倒入少许石蜡。再将镊子稍加热,夹取材料将切面朝下放入蜡模中,排列整齐。再放上包埋盒,轻轻倒入熔蜡。
8. 切片
①将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。
②将切片刀固定在刀夹上,刀口向上。
③摇动推动螺旋,使石蜡块与刀口贴近,但不可超过刀口。
④调整石蜡块与刀口之间的角度与位置,刀片与石蜡切片约成15度左右。
⑤调整厚度调节器到所需的切片厚度,一般为4-10微米。
⑥一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮,让蜡块切成蜡带,左手持毛笔将蜡带提起,摇转速度不可太急,通常以40-50r/min。
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