武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
7. 包埋
包埋时,用镊子夹取石蜡模子(金属质地)在酒精灯上稍加热,放在平的桌面上,从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯,倒入少许石蜡。再将镊子稍加热,夹取材料将切面朝下放入蜡模中,排列整齐。再放上包埋盒,轻轻倒入熔蜡。
8. 切片
①将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。
②将切片刀固定在刀夹上,刀口向上。
③摇动推动螺旋,使石蜡块与刀口贴近,但不可超过刀口。
④调整石蜡块与刀口之间的角度与位置,刀片与石蜡切片约成15度左右。
⑤调整厚度调节器到所需的切片厚度,一般为4-10微米。
⑥一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮,让蜡块切成蜡带,左手持毛笔将蜡带提起,IgM ELISA***盒,摇转速度不可太急,通常以40-50r/min。
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1、染色过强 原因 解决办法 抗1体的浓度过高或抗1体孵育时间过长 降低抗1体滴度(一般指浓缩性抗1体)抗1体孵育时间:室温1 小时或4℃过夜 孵育温度过高,孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB 显色时间过长或 DAB 浓度过高 显色时间不能超过5-10分钟,以显微镜下观察为准 2、非特异性背景染色 原因 解决办法 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3×5 ***中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭,孵育时间延长 ***中含内源性生物素 正常非***动物血1清再封闭 血1清蛋白封闭不充分 延长血1清蛋白封闭时间
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在反应产物中有与Ag结合的Ab※和游离和Ab※ ,如不将两者分离而测定标记物,测得的结果将为两者之和。因此,游离标记物与结合标记物的分离是标记***测定中的重要步骤。可采用多种手段,固相载体是其中之一。如将抗原或抗1体包被在固相载体上,然后再与标记的抗原或抗1体直接反应,结合的标记物被固定在载体上,而游离的标记物留于溶液中。这样可以通过洗涤将游离的Ab※除去,结合标记物的测定可在固相上进行。
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