武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
1、染色过强 原因 解决办法 抗1体的浓度过高或抗1体孵育时间过长 降低抗1体滴度(一般指浓缩性抗1体)抗1体孵育时间:室温1 小时或4℃过夜 孵育温度过高,孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB 显色时间过长或 DAB 浓度过高 显色时间不能超过5-10分钟,以显微镜下观察为准 2、非特异性背景染色 原因 解决办法 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3×5 ***中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭,孵育时间延长 ***中含内源性生物素 正常非***动物血1清再封闭 血1清蛋白封闭不充分 延长血1清蛋白封闭时间
但是这种特异性也不是绝1对的。假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗1体反应中可出现交叉反应。(2)更换每级透明剂,动作要迅速,一方面为了不使材料块干涸,另一方面能避免吸收湿气。例如:绒毛膜促性1腺激1素(hCG)和黄体生成激1素(LH)均由α和β两个亚单位组成,其结构的不同处在β亚单位,而两者的α亚单位是同类的。用hCG***动物所得的抗血1清中含有抗α-hCG和抗β-hCG两种抗1体,抗α-hCG抗1体将与LH中的
α酶位发生交叉反应。在临床检验中,如用抗hCG抗血1清作为妊1娠诊1断***检定尿液中hCG,只能用于hCG浓度较高的试验,否则妇女生理性排泄入尿液中的微量LH将与之发生交叉反应。3、细胞培养上清取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。因此在作为早1孕诊断(敏感度应达到50mIu/mlhCG)的实际中必须应用只对hCG特异的抗β-hCG,以避免与其它激1素的交叉反应的发生。
在反应产物中有与Ag结合的Ab※和游离和Ab※ ,如不将两者分离而测定标记物,测得的结果将为两者之和。因此,游离标记物与结合标记物的分离是标记***测定中的重要步骤。可采用多种手段,固相载体是其中之一。4、细胞裂解液1)吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。如将抗原或抗1体包被在固相载体上,然后再与标记的抗原或抗1体直接反应,结合的标记物被固定在载体上,而游离的标记物留于溶液中。这样可以通过洗涤将游离的Ab※除去,结合标记物的测定可在固相上进行。
版权所有©2025 产品网