武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
1、染色过强 原因 解决办法 抗1体的浓度过高或抗1体孵育时间过长 降低抗1体滴度(一般指浓缩性抗1体)抗1体孵育时间:室温1 小时或4℃过夜 孵育温度过高,孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB 显色时间过长或 DAB 浓度过高 显色时间不能超过5-10分钟,以显微镜下观察为准 2、非特异性背景染色 原因 解决办法 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3×5 ***中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭,孵育时间延长 ***中含内源性生物素 正常非***动物血1清再封闭 血1清蛋白封闭不充分 延长血1清蛋白封闭时间
但是这种特异性也不是绝1对的。机体被微生物感1染后,先产生IgM抗1体,然后产生IgG抗1体。假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗1体反应中可出现交叉反应。例如:绒毛膜促性1腺激1素(hCG)和黄体生成激1素(LH)均由α和β两个亚单位组成,其结构的不同处在β亚单位,而两者的α亚单位是同类的。用hCG***动物所得的抗血1清中含有抗α-hCG和抗β-hCG两种抗1体,抗α-hCG抗1体将与LH中的
α酶位发生交叉反应。在实践应用上,常采用生长点的培养使患病植物去病毒,以达到挽救优良品种,提高产量和质量之目的。在临床检验中,如用抗hCG抗血1清作为妊1娠诊1断***检定尿液中hCG,只能用于hCG浓度较高的试验,否则妇女生理性排泄入尿液中的微量LH将与之发生交叉反应。因此在作为早1孕诊断(敏感度应达到50mIu/mlhCG)的实际中必须应用只对hCG特异的抗β-hCG,以避免与其它激1素的交叉反应的发生。
④ 另取洁净的载玻片,捞起展开的切片,使其位于切片1/3处,另一端(磨边,粗糙的一端)磨面上标记或贴上标签,放于切片架上。
10. 脱蜡复水
将温箱温度调至65℃,待温度控制在60℃时,将切片连同切片架放入干燥的温箱内3-5小时至蜡熔化。
之后,石蜡切片经脱蜡透明Ⅰ、Ⅱ脱蜡各20min,勿动(防治***掉)此步为关键步,请轻拿轻放。然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各5min
11. 染色
切片放入苏1木1精中染色约10-30min。
染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低,适当缩短或延长。室温高时促进染色,染色时间可短些,否则可适当延长时间,冬季室温低时可放入恒温箱中染色。
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