大鼠内***(ET)ELISA***盒使用说明书

本***盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!

预期应用

ELISA法定量测定大鼠***、血浆或其它相关生物液体中ET含量。

实验原理

用纯化的ET***包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的ET***、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成***终的***。颜色的深浅和样品中的ET呈正相关。用***在450nm波长下测定吸光度（ 值），计算样品浓度。

***盒组成及***配制

1、 酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1 EU/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成1 EU/ml，0.5 EU/ml， 0.25 EU/ml，0.125 EU/ml，0.0625 EU/ml，0.0312 EU/ml，0.0156 EU/ml，样品稀释液直接作为空白孔 0 EU/ml。如配制0.5 EU/ml标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）1 EU/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

6、 检测溶液A：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液A 1:100稀释（如：10 检测溶液A / 990 检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100 /孔），实际配制时应多配制  0.1-0.2ml。

7、 检测溶液B：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

8、 底物溶液：1×10ml/瓶。

9、 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液：1×10ml/瓶（2 mol/L H₂SO₄）。

11、覆膜：5张

12、使用说明书：1份

自备物品